如何規(guī)劃PCR實驗室設(shè)計
作者： 實驗室設(shè)計發(fā)表時間：2018-09-29 11:15:31瀏覽量：5947【小中大】
如何建立標準PCR實驗室？ PCR實驗室如何設(shè)計成專業(yè)的？ PCR實驗室管理的關(guān)注點是什么？
標準PCR實驗室分為四個區(qū)域，即：
N1。試劑準備區(qū)；
N2。樣品加工區(qū)；
N3。核酸擴增區(qū)；
N4。...
文本標簽：PCR 實驗室,實驗室規(guī)劃，實驗室設(shè)計要求,實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)
如何建立標準PCR實驗室？ PCR實驗室如何設(shè)計成專業(yè)的？ PCR實驗室管理的關(guān)注點是什么？
標準PCR實驗室分為四個區(qū)域，即：
N1。試劑準備區(qū)；
N2。樣品加工區(qū)；
N3。核酸擴增區(qū)；
N4。產(chǎn)品分析區(qū)；
如果使用全自動分析儀，則可以適當?shù)亟M合區(qū)域。 （進入每個工作區(qū)域必須嚴格按一個方向，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服，如不同的顏色。工人離開工作區(qū)時不應(yīng)帶出工作服）
PCR實驗室布局
[各地區(qū)的職能分別為]
試劑準備區(qū)：擴增試劑的制備、包裝和貯存
樣品處理區(qū)：樣品注冊、子包；核酸提取、保存和加載
擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、注冊和報告
預(yù)擴增區(qū)和后擴增區(qū)應(yīng)嚴格分開，并且必須使用不同的房間。最好在兩個區(qū)域之間有一定的間隔。
使用商業(yè)試劑盒在樣品處理區(qū)域中制備小試劑
樣品處理區(qū)域和試劑制備區(qū)域可以位于同一房間，只要滿足以下操作和清潔要求：
在生物安全柜中操作；
每個實驗者、實驗組使用各自的試劑和消耗品；
將含有污染物的容器密封并使用一次；
實驗前后對操作區(qū)域和共用設(shè)備進行有效清潔和消毒。
PCR實驗室建設(shè)規(guī)劃要點
1、主要結(jié)構(gòu)：
主體是彩鋼板、鋁合金型材。房間的所有內(nèi)角、正角均由鋁合金50圓形鋁制成，這解決了容易污染的問題、灰塵、難以清潔等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡潔，外形美觀，密封性好。
2、標準三區(qū)分離和氣壓調(diào)節(jié)：
PCR過程分為試劑制劑。在三個獨立的實驗區(qū)中進行、樣品制備和PCR擴增測定。整個地區(qū)都有一個整體緩沖走廊。每個獨立的實驗區(qū)都設(shè)有一個緩沖區(qū)，每個區(qū)域都受氣壓調(diào)節(jié)，從而在整個PCR實驗過程中保護試劑和標本免受氣溶膠污染，減少了對人和環(huán)境的擴增產(chǎn)物的污染。
緩沖器I可以打開，緩沖器II的排氣扇和PCR放大區(qū)域在外面排出，可調(diào)節(jié)風(fēng)量的出風(fēng)口安裝在實驗區(qū)和每扇門的外壁上，空氣通風(fēng)在室內(nèi)通過回風(fēng)口。 。3、消毒：
紫外燈安裝在三個實驗區(qū)域和三個緩沖區(qū)的頂部，并在傳輸窗口內(nèi)進行消毒。
在試劑制備區(qū)域和樣品制備區(qū)域中還提供移動的紫外燈，以對實驗臺進行部分消毒。
4、機械鏈不銹鋼傳遞窗：
試劑和樣品通過機械互鎖不銹鋼（不建議用于電子聯(lián)鎖）進行交付，以確保試劑和樣品在轉(zhuǎn)移過程中不被污染（個人分流）
5、地
建議使用PVC盤繞地板或自流動地板以獲得良好的地面。易于清潔和耐腐蝕。水磨石地板也可以無條件地使用，或者大塊瓷磚（至少800 mm x 800 mm）接縫需要小于2 mm。
6、照明
燈具應(yīng)清潔光滑，可達到易于清潔的特點、無塵。
注意施工過程
●標準化的安裝流程和全面的服務(wù)流程
●嚴格遵循科學(xué)設(shè)計的安裝流程。
●安裝前，需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源線位置，電話網(wǎng)線入口位置，進水壓力，最小安裝空間，地面，通風(fēng)孔、進水管和下水管位置等。理想的空間大小和通風(fēng)口的大小。
設(shè)計要點
PCR實驗室可以是分散形式或組合形式。完成一組PCR實驗，通常通過試劑制備、樣品處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析四個實驗步驟，如果實驗過程需要，還應(yīng)增加樣品破碎過程。
一個、分散形成PCR實驗室
所謂的分布式PCR實驗室是指完成上述實驗過程的實驗室彼此相距很遠并且處于分布式排列。對于這種類型的PCR實驗室，不需要特殊條件，因為實驗不容易相互干擾。
兩個、組合形成PCR實驗室
所謂組合形式PCR實驗室是指完成PCR的四個實驗過程的實驗室彼此相鄰排列以形成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合式PCR實驗室，由于每個實驗的集中安排，容易引起相互干擾，因此對整體布局和屏障系統(tǒng)有一定的要求。每個艙室在入口處設(shè)有緩沖室，以減少室內(nèi)和室外空氣交換。
一些經(jīng)驗：
試劑制備室和樣品處理室應(yīng)略微正壓，以防止含有核酸氣溶膠的外界空氣進入，造成污染；
通過將進氣量控制為大于排氣量可以實現(xiàn)正壓效果。
核酸擴增室和產(chǎn)物分析室應(yīng)處于輕微的負壓下，以防止含核酸的氣溶膠擴散出污染試劑和樣品，通過控制排氣量可以實現(xiàn)負壓效應(yīng)大于進氣量。在理想情況下，可以在PCR實驗室的緩沖室中設(shè)定正壓，使得室內(nèi)空氣不會流到室外，室外空氣不會流到室內(nèi)。
PCR實驗室的進氣口由原來的中央空調(diào)控制。需要將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到指定的固定點，地面攤鋪后高度為2600mm。
如果使用熒光PCR機，則可以組合擴增室和產(chǎn)物分析室。
如果允許房間深度，可以設(shè)置PCR內(nèi)部專用走廊。應(yīng)該注意的是，在減少室內(nèi)和室外空氣交換時，緩沖室比專用走廊更有意義。
各個地區(qū)之間應(yīng)該有單向的實驗過程。、后勤、人流和氣流形成單向過程的保護屏障，避免實驗之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠污染實驗過程的錯誤后果。
實驗室的墻壁，包括天花板，在結(jié)構(gòu)上應(yīng)該是密不透的、；各個角應(yīng)采用圓弧線過渡；墻內(nèi)的墻壁干凈輕便、不吸收、耐腐蝕、易于清潔和消毒；地板材料應(yīng)滿足無間隙、無泄漏、光滑和清潔、耐腐蝕性要求。
PCR實驗室主要設(shè)備
試劑準備區(qū)
儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈站、采樣器、調(diào)音臺、天平和離心機等，采樣器除了特殊的、天平外，還應(yīng)有定時校準
試劑應(yīng)放在干凈的工作臺中?；旌衔飸?yīng)該在分子生物學(xué)課上。制備試劑后，應(yīng)進行質(zhì)量檢測：是否有污染。、是檢測試劑的擴增效應(yīng)。
標本準備區(qū)
儀器設(shè)備主要有生物安全柜、采樣器、離心機、培養(yǎng)箱、攪拌機等。
擴增區(qū)
擴增區(qū)的主要儀器是核酸擴增儀、超潔凈表、微量取樣器、離心機、可移動紫外燈。儀器需要校準。它配備了UPS電源，以防止停電對電壓波動引起的放大效應(yīng)的影響。
分析區(qū)域
該區(qū)域使用的設(shè)備有一個酶標儀、洗衣機洗衣機、采樣器和水浴等。潔凈實驗區(qū)緩沖室的面積不能超過主實驗室的八分之一，這是受監(jiān)管的。
一些瑣碎的、不可忽視的設(shè)計
1.實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計和壓力控制PCR實驗室沒有嚴格的純化要求，但為了避免各個實驗區(qū)域之間存在交叉污染的可能性，建議使用全流量全流量氣流組織。同時，要嚴格控制排氣的比例為、，以保證每個實驗區(qū)的壓力要求。
2.預(yù)防和控制污染
PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。在實踐中，以下類型的污染是常見的：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑污染和試樣之間的污染。由于污染發(fā)生，必須停止實驗直到找到污染源，并且必須丟棄實驗結(jié)果并且需要重復(fù)實驗。因此，在污染發(fā)生后，在實驗室周圍浪費尋找污染源不僅浪費時間和麻煩，而且浪費人力和資源。因此，為避免污染，應(yīng)首先進行預(yù)防，而不是排除。
PCR實驗室必不可少的嚴格管理
?。?）嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進入或離開實驗室，必要時設(shè)置進出整個實驗區(qū)的獨立通道和門；
?。?）盡量減少實驗區(qū)域內(nèi)不必要的移動，以減少交叉污染的可能性
?。?）擴增產(chǎn)物分析區(qū)是擴增產(chǎn)物污染的最重要來源。廢液不能傾倒在實驗室中。必須將其浸入消毒劑溶液中并丟棄在遠離實驗室的地方。使用過的尖端是一次性的。材料也應(yīng)在消毒液中浸泡和消毒處理，如焚燒；
?。?）擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能存在一些基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護。
3.5完整的實驗室配套設(shè)施完整的實驗室配套設(shè)施是確保實驗工作的必要條件。設(shè)備和儀器應(yīng)根據(jù)每個實驗室的實驗內(nèi)容配備，如超潔凈工作臺、離心機、取樣器等。
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